Calcul de reconstitution et de dilution des peptides lyophilisés
L'arithmétique de la reconstitution est simple, mais il est facile de se tromper sous la pression du temps, et le coût d'une erreur est une solution mère à la mauvaise concentration pendant toute la durée de vie du flacon. Il ne s'agit ici que de l'arithmétique — pas d'une indication d'usage.
L'équation unique
concentration (mg/mL) = masse du flacon (mg) ÷ volume de diluant (mL)
Un flacon de 10 mg reconstitué avec 2 mL d'eau bactériostatique donne 5 mg/mL. Le même flacon avec 1 mL donne 10 mg/mL. Rien d'autre n'entre en jeu : la poudre lyophilisée apporte un volume négligeable.
Travailler en microgrammes
La plupart des travaux de laboratoire sont plus simples en µg/mL. La conversion est 1 mg/mL = 1000 µg/mL. Un flacon de 5 mg dans 5 mL donne 1 mg/mL, soit 1000 µg/mL, ce qui signifie que 0,1 mL contient 100 µg.
Dilution en série
Pour ramener une solution mère à une concentration de travail, utilisez C₁V₁ = C₂V₂. Pour obtenir 10 mL à 50 µg/mL à partir d'une solution mère à 1000 µg/mL :
V₁ = (50 × 10) ÷ 1000 = 0,5 mL de solution mère, complétés à 10 mL au total.
Notez « complétés à », pas « plus ». Ajouter 10 mL de diluant à 0,5 mL de solution mère donne 10,5 mL et une concentration erronée de 5 %.
Les deux erreurs
Injecter le diluant directement dans la poudre
Diriger un jet d'eau directement sur un culot lyophilisé provoque de la mousse et peut dénaturer le matériel à l'interface air-liquide. Inclinez l'aiguille pour que le diluant coule le long de la paroi intérieure du flacon, puis laissez-le se dissoudre sans agitation. Tournez doucement si nécessaire. Ne secouez pas et n'utilisez pas de vortex.
Supposer que la masse indiquée est la masse de peptide
Un flacon lyophilisé contient du peptide, de l'eau résiduelle et des contre-ions. Si le certificat d'analyse indique une teneur en peptide de, disons, 82 %, alors un flacon de 10 mg contient environ 8,2 mg de peptide. Lorsque votre travail dépend de la masse de peptide plutôt que de la masse de poudre, calculez à partir du chiffre du certificat, pas de l'étiquette.
Planifier le volume avant de commencer
Choisissez le volume de diluant en fonction de la concentration dont vous avez réellement besoin, car il n'est pas possible de revenir en arrière. Une approche générale : déterminez le plus petit volume que vous devrez mesurer avec précision, puis choisissez une concentration pour laquelle ce volume se situe confortablement dans la plage de votre pipette. Mesurer 0,02 mL avec précision est plus difficile que mesurer 0,2 mL.
Stockage après reconstitution
Une solution reconstituée est bien moins stable que la poudre lyophilisée. Conservez à 2–8 °C, protégez de la lumière, et aliquotez si le flacon doit être prélevé à plusieurs reprises — chaque cycle de congélation-décongélation et chaque entrée à l'aiguille coûte du matériel et ajoute un risque de contamination.
Aegis Bio fournit de l'eau bactériostatique en flacons de 3 mL et 10 mL pour la reconstitution, et chaque fiche composé comporte un tableau de référence de reconstitution indiquant la concentration obtenue pour des volumes de diluant courants.
Tous les matériels sont fournis exclusivement pour la recherche en laboratoire in vitro et ne sont pas destinés à un usage humain ou vétérinaire.