Matemática de reconstitución y dilución para péptidos liofilizados

La aritmética de reconstitución es simple, pero es fácil equivocarse bajo presión de tiempo, y el costo de equivocarse es una solución madre con la concentración incorrecta durante toda la vida del vial. Esto es solo la aritmética — no es orientación sobre el uso.

La única ecuación

concentración (mg/mL) = masa del vial (mg) ÷ volumen de diluyente (mL)

Un vial de 10 mg reconstituido con 2 mL de agua bacteriostática da 5 mg/mL. El mismo vial con 1 mL da 10 mg/mL. Nada más lo afecta: el polvo liofilizado aporta un volumen insignificante.

Trabajar en microgramos

La mayoría del trabajo de laboratorio es más sencillo en µg/mL. La conversión es 1 mg/mL = 1000 µg/mL. Un vial de 5 mg en 5 mL es 1 mg/mL, o 1000 µg/mL, lo que significa que 0.1 mL contiene 100 µg.

Dilución seriada

Para llevar una solución madre a una concentración de trabajo, use C₁V₁ = C₂V₂. Para preparar 10 mL a 50 µg/mL a partir de una solución madre de 1000 µg/mL:

V₁ = (50 × 10) ÷ 1000 = 0.5 mL de solución madre, llevados a 10 mL en total.

Note «llevados a», no «más». Agregar 10 mL de diluyente a 0.5 mL de solución madre da 10.5 mL y una concentración que se desvía un 5%.

Los dos errores

Inyectar el diluyente directamente sobre el polvo

Dirigir un chorro de agua directamente sobre una pastilla liofilizada provoca espuma y puede desnaturalizar el material en la interfase aire–líquido. Incline la aguja para que el diluyente corra por la pared interna del vial, y luego déjelo disolverse sin agitación. Agite suavemente en forma circular si es necesario. No sacuda ni use vórtex.

Asumir que la masa de la etiqueta es masa de péptido

Un vial liofilizado contiene péptido más agua residual más contraiones. Si el certificado de análisis indica un contenido peptídico de, por ejemplo, 82%, entonces un vial de 10 mg contiene aproximadamente 8.2 mg de péptido. Cuando su trabajo depende de la masa de péptido y no de la masa de polvo, calcule a partir de la cifra del certificado, no de la etiqueta.

Planificar el volumen antes de empezar

Elija el volumen de diluyente según la concentración que realmente necesita, porque no se puede deshacer después. Un enfoque general: decida el volumen más pequeño que necesitará medir con precisión, y luego elija una concentración donde ese volumen quede cómodamente dentro del rango de su pipeta. Medir 0.02 mL con precisión es más difícil que medir 0.2 mL.

Almacenamiento después de la reconstitución

Una solución reconstituida es mucho menos estable que el polvo liofilizado. Almacene a 2–8 °C, proteja de la luz, y fraccione en alícuotas si el vial se va a usar repetidamente — cada ciclo de congelación–descongelación y cada entrada de aguja le cuesta material y aumenta el riesgo de contaminación.

Aegis Bio suministra agua bacteriostática en viales de 3 mL y 10 mL para reconstitución, y cada página de compuesto incluye una tabla de referencia de reconstitución que muestra la concentración resultante en volúmenes de diluyente habituales.

Todos los materiales se suministran exclusivamente para uso en investigación de laboratorio in vitro y no son para uso humano ni veterinario.